بیان ژن فیتاز گونه های باسیلوس جداشده از خاک به روش ملکولی

چکیده زمینه و هدف: شناسایی و به کارگیری فیتاز جداشده ازمیکروارگانیسم های موجود در خاک ، اهمیت زیادی در تولید این آنزیم به منظور استفاده تجاری در صنایع مختلف دارد.این مطالعه به منظور شناسایی گونه های باسیلوس تولید کننده آنزیم فیتاز و جداسازی ژن تولید کننده این آنزیم صورت گرفت. روش بررسی: نمونه برداری از خاک های مختلف مناطق کوهستانی شهرستان تنکابن انجام شد. جداسازی اولیه باسیلوس در محیط غنی bacillus medium agar صورت پذیرفت. بعد از جداسازی باکتری ها و استخراج ژنوم باکتری، با استفاده از پرایمر اختصاصی ژن تولید کننده آنزیم شناسایی شده و نسخه های زیادی از این ژن با روش pcr تکثیر شد. با استفاده از بررسی های تکمیلی ازجمله sds-page وسنجش فعالیت آنزیمی اندازه این پروتئین وشرایط بهینه تولید آن ارزیابی گردید. یافته ها: از 40 نمونه خاکی که مورد آزمایش قرار گرفتند یک باکتری ترشح کننده آنزیم فیتاز جداسازی شد و این باکتری مورد توالی یابی قرار گرفت و گونه باسیلوس سوبتلیس سویه اس تی آر تشخیص داده شد. اندازه پروتئین فیتاز تولید شده از این ژن در حدود 45 کیلو دالتون بوده و فعالیت آنزیم در دمای 55 درجه در حدود 1/. در طول موج 415 نانومتر به دست آمد. ژن فیتاز با اندازه حدود bp1200 تکثیر صورت گرفت. نتیجه گیری: با توجه به اینکه میکروارگانیسم های تولید کننده آنزیم فیتازدرشرایط محیطی طبیعی آنزیم را در مقادیر محدود و با کارائی و کیفیتی در سطوح میکروارگانیسم تولید می کنند، بنابرابن شناسایی وجداسازی باسیل های تولید کننده فیتاز و تخلیص این پروتئین از اهمیت ویژه ای برخوردار می باشد. واژه های کلیدی: باسیلوس سوبتلیس،فیتاز، sds-page، فعالیت آنزیمی، واکنش زنجیره ای پلیمرازی